A Tecnologia do DNA Recombinante, chamada de modo mais informal de Engenharia Genética, corresponde aos métodos (técnicas) utilizados na manipulação e recombinação dos genes, através de um conjunto de conhecimentos científicos (genética, biologia molecular, bioquímica, entre outros), que reformulam, reconstituem, reproduzem e até criam seres vivos. Quando aplicado ao DNA, um clone representa muitas cópias idênticas de um segmento particular do gene. Classicamente, o processo de clonagem do DNA a partir de qualquer organismo envolve cinco procedimentos gerais. Assinale a alternativa que corresponde à ordem correta dos procedimentos de clonagem do DNA: I- Cortar o DNA-alvo em locais precisos. Endonucleases específicas de sequência (endonucleases de restrição) fornecem as tesouras moleculares necessárias. II- Juntar dois fragmentos de DNA de modo covalente. A enzima DNA-ligase liga o vetor de clonagem e o DNA a ser clonado. Moléculas de DNA compostas por segmentos ligados de modo covalente a partir de duas ou mais fontes são chamadas de DNAs recombinantes. III- Selecionar uma pequena molécula transportadora de DNA capaz de autorreplicação. Esses DNAs são chamados vetores de clonagem (vetores são agentes de entrega). São geralmente plasmídeos ou DNAs virais. IV- Transportar o DNA recombinante do tubo de ensaio para uma célula hospedeira que irá proporcionar a maquinaria enzimática para a replicação do DNA. V- Selecionar ou identificar as células hospedeiras que contêm DNA recombinante. Corresponde corretamente à ordem dos procedimentos de clonagem do DNA: